轉染試劑是一種多聚陽離子聚合物，具有較高的陽離子電荷密度使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體。這種聚陽離子能將各種報告基因轉入各種種屬細胞，其效果好于脂質(zhì)聚酰胺，經(jīng)進一步的改性后，其轉染性能好于樹枝狀聚合物，而且它的細胞毒性低。
所列步驟適用于24孔板培養(yǎng)的哺乳動物細胞，其他培養(yǎng)材料，請參考表1按照轉染規(guī)模調(diào)整，所有數(shù)量和體積均是按孔計算。大部分細胞系所使用的DNA(μg)與VigeneFection(μg)的比值為1:3或1:4，轉染狀態(tài)良好的細胞可獲得高轉染效率、高表達水平和低細胞毒性。
1、貼壁細胞：轉染前一天每孔0.5-2×105個細胞接種于500μl培養(yǎng)基中，在轉染時細胞可長至90-95%融合；懸浮細胞：在配制轉染液前每孔4-8×105個細胞接種于500μl培養(yǎng)基中。
2、轉染液制備，每孔細胞用量如下：
A、用50μlDMEM培養(yǎng)基稀釋質(zhì)粒DNA，輕輕混勻。
B、取適量VigeneFection在50μlDMEM培養(yǎng)基中稀釋，室溫孵育5min。
C、將前兩步所稀釋的DNA和VigeneFection混合，輕輕混勻，室溫放置30min。
3、在每孔細胞中加入混合后的轉染液，輕輕搖勻。
4、貼壁細胞可在轉染4-6h后可更換培養(yǎng)基，懸浮細胞可在轉染后的18-48h之間，對細胞進行換液。轉染18-48h之后可檢測基因表達。如果檢測到蛋白表達，請在轉染后24-72h收集培養(yǎng)液。
5、對于穩(wěn)定轉染，在轉染24h后以1:10傳代培養(yǎng)，第二天可加入選擇培養(yǎng)基。
轉染試劑注意事項：
推薦在混合前使用Opti-MEM（Cat.No.267485)或DMEM細胞培養(yǎng)基(Cat.No.SH30022.01B)稀釋VigeneFection和核酸。
轉染過程中勿向培養(yǎng)基中添加抗生素，以免造成細胞死亡。
不同批次實驗請保持細胞接種條件相同。
轉染前細胞的狀態(tài)好壞對終的轉染效果高低影響很大，請務必保證轉染前，細胞處于良好的生長狀態(tài)。
